Transgénesis
La Unidad de Transgénesis (UT) tiene, como principal objetivo, la producción de ratones modificados genéticamente por la introducción de moléculas de ADN foráneo en sus genomas (los denominados ratones transgénicos) y su suministro, según sea requerido, a los diferentes grupos científicos del CNIC de acuerdo con sus necesidades de investigación.
Desde un punto de vista biomédico, tales ratones representan una herramienta de suma importancia para estudiar y conocer la función génica in vivo dentro de la complejidad de un organismo completo.
Esto ha conducido al desarrollo de modelos animales de enfermedades humanas permitiendo la mejora del conocimiento de las enfermedades y, en algunos casos, para el desarrollo de nuevas y más eficientes terapias. En nuestro caso, servirán como punto de partida para analizar procesos básicos de la fisiología y homeostasis cardiovasculares así como para ensayar nuevas terapias experimentales.
Otros objetivos importantes de la UT son:
- Rederivar líneas de ratón a la zona estéril de la Unidad Experimental
- Criopreservar las valiosas cepas de ratón producidas y otras
- Puesta a punto en nuestras instalaciones de nuevas técnicas publicadas relacionadas con la biología reproductiva y del desarrollo en el ratón
- Producir modelos de enfermedades animales por la utilización de técnicas quirúrgicas
- Proporcionar las técnicas de transgénesis en ratón más modernas así como desarrollar nueva tecnología propia según las necesidades de los grupos de investigación del CNIC
Para lograr exitosa y eficientemente todos estos objetivos, la unidad dispone de equipación de vanguardia e instalaciones adecuadas. Entre otros, la unidad tiene dos laboratorios ubicados en la Unidad Experimental: uno es el llamado laboratorio de micromanipulación/microinyección y el otro es el laboratorio de transferencias embrionarias.
Entre las técnicas utilizadas en la UT para la realización de sus actividades están:
- Producción de ratones transgénicos por:
- Microinyección Pronuclear (microinyección directa de moléculas de ADN en los pronúcleos de ovocitos fertilizados)
- Microinyección Subzonal o Perivitelina de ovocitos fertilizados con retrovirus/lentivirus modificados genéticamente
- Microinyección pronuclear y citoplásmica en cigotos y embriones de 2 células con CrispR-Cas9 para generación de ratones transgénicos.
- Electroporación de cigotos de ratón con CrispR-Cas9 para generación de ratones transgénicos.
- Producción de ratones quimeras para la obtención de ratones Knock-Out (KO) y Knock-In (KI) por:
- Agregación de embriones de ocho células (E8C) con células madre embrionarias de ratón modificadas genéticamente (ES-Cells)
- Microinyección de embriones de ocho células (E8C)/blastocistos con células madre embrionarias de ratón modificadas genéticamente (ES-Cells)
- Microinyección pronuclear y citoplásmica en cigotos y embriones de 2 células con CrispR-Cas9 para generación de KO/KI mediante floxeado de regiones o inserción de cassettes.
- Rederivación de líneas de ratón por transferencia embrionaria
- Criopreservación de líneas de ratón por:
- Congelación de embriones
- Congelación de esperma
- Fertilización in vitro (IVF)
- Inyección Intracitoplásmica de Esperma (ICSI)
- Otras técnicas desarrolladas por la Unidad de Transgénesis e implicadas en el manejo de animales de experimentación:
- Ovariectomía
- Trasplante ovárico
- Técnicas de inseminación artificial: intrabursal, transoviductal e intrauterina
- Técnicas desarrolladas por la Unida de Transgénesis y al servicio del CNIC
- Manejo de tetraploides (obtención, agregaciones y microinyección)
- Técnicas de Enucleación/Electrofusión con carioplastos y citoplastos para la generación de líneas de ratón conplásticas
- Técnicas de Criopreservación de germoplasma de Pez Cebra: espermatozoides.
